2020《中國藥典》新增通（tōng）用技術要（yào）求-X射線熒光光譜法藥物分析的應用

       藥物安全與國計民生息息相關，世界各國都越來越重視藥物質量安全。2010年國際人用（yòng）藥品注冊技術協調會(ICH)發布了Q3D元素雜質指導原則，ICH*Q3D準則規定（dìng）了24種有毒（dú）元素每天攝（shè）入的限製量，並（bìng）要求對這些元素進行（háng）高靈敏度、高精度測量。美國、歐盟（méng）也進一步限製了藥品中的元素雜質水平（píng），藥品中元（yuán）素雜質的控製越（yuè）來越受到關注。

       各（gè）種化學（xué）和儀器（qì）分析方法在解決藥品研發和質量控製中發揮著重要作用。目前常用於藥品質量控製和（hé）評價的分析技術主要（yào）包括：化學法、色譜法、光譜法、電化學法、電（diàn）泳（yǒng）法、流動注射和順（shùn）序注射（shè）分（fèn）析以（yǐ）及聯用技術（shù）等。X射線熒光光譜分析（xī）法(X-rayFluorescenceSpectrometry，XRF)是元（yuán）素成份分析中最為有效的（de）方法之一，此方法測試元素範圍廣，可測定原子序數5B-92U（Be）的所（suǒ）有元素，並（bìng）可多元素同（tóng）時測定，是一種快速且精密度高的分析方法（fǎ），廣泛應用於冶煉、地礦、農業、環保、醫藥、考古、工業製造和司法鑒定等眾多領域。x射線熒（yíng）光光（guāng）譜具有（yǒu）快速、無（wú）損、前處理簡單、分析精度高、分析範圍廣（guǎng）、穩定性好等優點。在藥品檢測方麵，XRFS多用於（yú）藥品的元素成（chéng）分分析以及鑒定評價和質量控製。

一、Ｘ射線熒光光譜法（XRFS）在藥物檢測標準中的現狀

      《美國藥（yào）典》〔USP〕41版通則〈735〉、《歐洲藥（yào）典（diǎn）》〔EP〕9.0版通則〈2.2.37〉和（hé）《英國藥典》〔BP〕2019版〈附錄ⅡK〉均收載（zǎi）了（le）XRF技術。USP介紹（shào）了XRF的定義、儀器原理、儀器性能、測（cè）定方法、確認和驗證（zhèng）等內容。EP介紹了XRF的定義、原理、測定方法、校正方法及計算公式。BP介紹了XRF的原理、儀器、基體效應和幹擾、樣品製備（bèi）、測定方法、儀器性能控製和驗證要求。BP還指（zhǐ）出XRF作為質量控製或過程控（kòng）製方法，廣泛用於篩選原料藥（yào）和製劑中的元素雜質。由於XRF的非破（pò）壞性，適用於過程分析（xī）技術（PAT），如分析原料藥中殘留（liú）的痕量催化劑。
       2020年版中國藥典（四部）新增通用技術名單包含〈0461X射線熒光（guāng）光譜法〉，P57。

       標誌著我國藥物雜質元素分析上邁出了重要一步，有（yǒu）效補充了（le）現有分析手段（duàn），特別是在快速篩選（xuǎn）和質量控製上。

二、X射線熒光光譜（pǔ）儀（XRF）的原理、分類和特點

       X射線熒光光譜（XRF）法是利（lì）用初級X射（shè）線光子激發待測物質中的原子（zǐ）內層電子，使之產生特征X射線熒光（次級X射線（xiàn）），通過精確測（cè）量熒光的能量或波長，根據波長與元素序數間的關係以及熒（yíng）光強（qiáng）度與含量的（de）正比關係，對被測樣（yàng）品中的元素進行定性、定量分析的方法。
       XRF具有分析速度快、分析元素範圍廣、前處理簡單、汙染小、成本低以及無損等優點（diǎn），可用於各類樣品中主、次（cì）、痕量多元素同時測定。根據分光方式及光路的不，XRF可（kě）分為波長（zhǎng）色散（sàn）型WDXRF、能量色散（sàn）型EDXRF、全反射型（TXRF）等。WDXRF分辨率（lǜ）高、檢出限低，體積大，需（xū）要較強的光源和（hé）專用的晶體光學元（yuán）件，價格高。EDXRF不使用分光（guāng）晶體，光（guāng）路相對簡單，光源功率也相對較小（xiǎo），價格低。自20世紀60年代早期開（kāi）始逐（zhú）漸商（shāng）品化，隨（suí）著硬件和軟件的不斷（duàn）發展（zhǎn），逐漸成本元素成份分析的主要手段之（zhī）一。目前同時配備XRF、ICP、ICP-MS是國內外分析實（shí）驗室的趨勢，利用XRF分析含量較高的元素，用電感耦合（hé）等離子體質譜（pǔ）ICP-MS分析低濃度的元素。

三、XRF在藥物元素分析中的應用

1、在藥物研發中的應用

       製藥企業通常將新藥研究重點聚焦於未滿足的醫療需求上（shàng），新藥的研發速度往往由患（huàn）者驅動。因此藥物研發過（guò）程（chéng）中快速做（zuò）出決策，可更快地提高患者的治（zhì）愈率，元素雜質分析是提高研發效率（lǜ）的一（yī）個重（chóng）要步驟。金（jīn）屬催化劑通常用於原料藥的合成中，研發者需要監（jiān）測各種原料和合成工藝中金屬催化劑的殘（cán）留情況，從而實施有效的控製策略。通常使用靈敏（mǐn）度高、精密度高（gāo）和選擇性好的電感耦（ǒu）合等離子體原子發射光譜法（ICP-OES或ICP-MS）對藥物中的元素雜質進行（háng）分析。然（rán）而在（zài）藥物研發期間許多樣品不需要這些昂貴（guì）、費時（shí）、靈敏（mǐn）度高的技術。研發者通常（cháng）需要（yào）快速確定元素含量，以（yǐ）提高優（yōu）化合成工藝的效率。XRF可（kě）更快速、更便捷地測定原（yuán）料、中（zhōng）間體（tǐ）和研（yán）發（fā）樣品中的元素雜質含量，同時保證必要（yào）的準確度。XRF可替（tì）代傳統的ICP-OES測定金屬雜質含量，快速確定金屬催化劑去除工藝的有效性，可為原子光（guāng）譜和工藝化學部門節省近兩個月的全職人力工時，同時節省溶劑、氬氣和耗材等（děng）使用（yòng）費用（yòng）。

2、在原料藥元素雜質分析中的（de）應用

       作為（wéi）提高藥物安全（quán）性和有效（xiào）性的一部分，製藥企業和監管機構對原料（liào）藥（API）的雜質控製（zhì）十分重視（shì）。元素雜質可以從各種來源（如原（yuán）料、試劑、溶劑、催化劑、反（fǎn）應容（róng）器、管道和其他用於合成藥物的（de）設（shè）備）引入原料藥中。由於某些（xiē）元素（sù）具有潛在的毒（dú）性，美國FDA指南指出，在製（zhì）藥生（shēng）產中控製殘留元素含量至關重要。MarguE等利用（yòng）WDXRF測定原（yuán）料（liào）藥中的金屬雜質鐵（tiě）、鋅（xīn）、鉻、鎳方（fāng）法（fǎ）的檢出限和定量限滿足歐洲藥品評價局（EMA）和ICHQ2（R1）的要求，適用於原料藥目（mù）標無機雜質（zhì）的定性和定量檢測。與藥典的重金屬目視比色檢測方法不同，該技術可以輕鬆實現自（zì）動化，是快速常規（guī）分（fèn）析的理想工具。催化在醫藥化學工業中具有重要的作用（yòng），它可以減（jiǎn）少碳-碳和碳雜原子鍵形成過程中的活化能，從而提高結構（gòu）改造的效率，降低總成本和時間。鈀通常（cháng）被認（rèn）為是原料藥形成碳-碳和碳雜原子鍵應用最廣泛的金屬，在醫藥工業中廣泛用於催（cuī）化反應，但必須將其除去（qù）後（hòu）方可成為藥用（yòng）原料。MarguE等（děng）通過X射線熒（yíng）光光譜儀建立了一種簡單（dān）、快速、可靠的分析方法，可測定三唑類抗真菌原料藥中催（cuī）化劑靶的殘留量（liàng）。
        EDXRF類型中的（de）TXRF比傳（chuán）統EDXRF的背景信號更（gèng）低且檢測限低3個數量級，還具有動態（tài）範（fàn）圍寬（至少4個數量級）、所需樣品量小（ug）、定量簡單（dān）、基體效應可忽略等優點，可（kě）通過內標實現對原子（zǐ）序數在14~92內的多元素快速定量測定，是一種快速的（de）元素篩選分析（xī）技（jì）術。WagnerM等利用TXRF研究了不同來源的胰島素、普魯卡因（yīn）和色氨酸樣品（pǐn）中的微量元素的含量比例，得到了元素指紋圖譜相關信息，能夠區分不同生產純（chún）化（huà）工藝的不（bú）同批（pī）次的樣品（pǐn）。LsztityA等利用TXRF篩查（chá）發現，左旋多巴中金屬含量低於5ug/g，亞葉（yè）酸鈣中鐵、鋅、鍶的含量分別為為（wéi）44、10、6ug/g，馬來酸依那普利中鐵（tiě）的（de）含量（liàng）為17ug/g，AntoszFJ等利用TXRF對原料藥樣品中的鈀和銅（tóng）進行了定量分析，測定（dìng）結果在檢出限、定量限、準確度和精密度（dù）方麵與ICP-MS相當。

3、在藥用輔料元（yuán）素雜質分析中的應用

       2015版（bǎn）《中（zhōng）國藥典》采用原子吸收（shōu）光譜法（AAS）測定明膠空心膠囊中的有毒重金屬鉻的殘留，該法需要複雜的前處理過程，時間消耗較長。李俊卿、尹利（lì）輝等建（jiàn）立了（le）EDXRF快速檢測明膠空心膠囊中鉻的（de）含量。方法（fǎ）的檢測限為10mg/Kg，與AAS測試（shì）結果比較，Cr含量大於10mg/Kg的陽性樣品的檢測率為100%。該（gāi）方法可以（yǐ）無損（sǔn）傷直接測試樣品，一次同（tóng）時分析多種元素，分析時（shí）間，4分鍾即可篩查出一個樣品，大（dà）大提高了分析效率。

4、在製劑元素雜質分析中的應用

       對患者而言，藥物製劑的安全性和有（yǒu）效性更為重要。因此袁重點研究XRF在製劑（jì）元素雜質分析中的應用比工藝研發時分析個別原（yuán）料藥的元素雜質（zhì）殘留量更有意義。GoncalvesLML利用WDXRF對兩種原研藥和仿製藥（yào）中的金屬元素雜質含量進行了（le）測定，結果顯示WDXRF在一定（dìng）範圍（wéi）內具有（yǒu）可接受的線性、精密度（dù）和準確度，適用於藥物製劑中銅、鋅、鐵、鉻雜質的測定，是藥典中重（chóng）金屬目視比色檢測法、AAS、ICP的良好替代方法。
       由於製樣簡（jiǎn）單、設（shè）備和分析成本較低，以及可對大量樣（yàng）品進行快速篩查，XRF已（yǐ）被美（měi）國FDA用（yòng）於各種（zhǒng）監管用途。

四、2020《中國藥典》〔四（sì）部〕〈0461X射線熒光光譜儀〉通用技術（shù）要求

        X射線熒光光譜法(XRF)是（shì）一種基於測量由初級X射線激發的原子內層電子產生特征次級x射線的分析方法。XRF可用於液（yè）體、粉末及（jí）固體材（cái）料（liào）的定性、定量分析。XRF儀可分為（wéi）波長色散型（xíng）(WDXRF)和能量色散型(EDXRF)。
       當X射線照射到供試品時，供試品中（zhōng）的各元素被激發而（ér）輻射出各自的熒光x射線。通過準直器（qì）經（jīng）分光晶體分光，按（àn）照布拉格定律產生衍射，使不同波長的熒光x射線按照波長順序排列成光譜，不同波長的譜線由探測器在不同的衍射角上接收。根據測得譜（pǔ）線的（de）波長識別元素（sù）種類;根據元素特征（zhēng）譜線的強度與元素含量間的關係，計算獲得供試品中每種元素含量百（bǎi）分數，即為X射線熒光光（guāng）譜（pǔ）分析法。

供試品的製備
       液體供（gòng）試品可以直（zhí）接進樣分析，固體供試品可以直接壓片或與適當（dāng）的輔劑混合處理後壓片進（jìn）樣分析。

儀器的（de）校正和檢定
       儀器使用前應使用國（guó）家標準（zhǔn）物質或其他可溯源的標準物質校（xiào）正。

測定法
       X射（shè）線熒光光譜法中一般應選擇強度大（dà）、幹擾少、背景低的特征譜線作為分析（xī）線。

定性分析
       根據每種元素特征x射線熒光譜線（xiàn）可對供試品（pǐn）中所含元（yuán）素種類進行定性分析。

定量測定法
(1) 標準曲線法
       液體（tǐ）樣品（pǐn）采用（yòng）元（yuán）素不同濃度的對照品或者（zhě）采用（yòng）元素分級稀釋法製備不同濃度的對照品供檢測分析用，固體樣品采用不同含量的對照品或者采用（yòng）標準加人法製備不同含量的對照品供檢測分析用（yòng）。對照品應與供試（shì）品的化學組（zǔ）成和物理性質等方麵一（yī）致。分別測定係列對（duì）照品的X射線（xiàn）強度，以待測元素的濃度(含量)為橫（héng）坐標，以X射線強度為縱坐標，建立標準曲（qǔ）線。標準曲線應在測定前或定（dìng）期進行校準。

(2) 內標法
      將相同量（liàng）的內標元（yuán）素分別加人（rén）到待測元素（sù）已知並且元素濃度(含量)呈梯（tī）度的一-組樣品中製成係列對照樣品。在選定的分析條件下分別測量對照品（pǐn）中待測元素與內標元素的X射線強度，計算待測元素與內標元素的（de）X射線強度比，以該（gāi）強度比為縱坐（zuò）標，待測元素濃度(含量)為橫坐標建立標準曲線。
      在待測樣品中也加（jiā）入相同量的同一種內標元素，製成供試（shì）品，同（tóng）法測量並求得X射線強度比，由標準曲（qǔ）線獲得待測元素的濃度(含量)。

(3) 標準加入法
       取相同量（liàng）供試品（pǐn）(或相同體積供試品溶液（yè）)6份，除第一份外，在其他幾份中，分別精密加入不同（tóng）量的待測元素對照品（pǐn）(或對照品溶液（yè）)，製成係列待測樣品;在選定的分析條件下分別（bié）測定，以待測元素X射線強度為縱坐標，待測元素加入量為橫坐標，繪製標準曲線，將標準曲線延長交於橫坐標，由交點與原點的距離求算供試品中待（dài）測元素的濃度(含量)。此法要求待（dài）測元素的濃度(含（hán）量)與X射線（xiàn）強度（dù）呈線性關係。

(4) 數學校正法
       數學校正法（fǎ）中的經驗係數法、經驗係（xì）數與基本參數（shù）聯（lián）用法等，用於各種不同分析對象時，可有（yǒu）效地計算和校正由於基體的吸收和增強效應對分析結（jié）果的影（yǐng）響，對於譜線幹擾和計數（shù）死時間，也可以（yǐ）得到有效的校正。

理學X射線熒光光譜（pǔ）儀助力藥物中金屬元素成份分析（xī）

WDXRF/TXRF

五、小結

       XRF法具有快速（sù）、準確、非破壞性等優點，分析元素覆蓋（gài）麵廣（包括鈹～鈾），分析濃度範圍寬（0.0001％～100％），分（fèn）析樣品可以是（shì）固體或液體。而隨著科技的不斷發展多種分析方法和技術的聯用將是未來的發展方向，XRF法的應用範圍也將不斷擴大（dà）。
       可作為AAS、ICP-AES和ICP-MS等（děng）元素分析技術的有效補充，可定量、定性分析原藥、輔料、製劑、包（bāo）材中的殘留元素。
       目前USP、EP、BP、《中國藥典》均已收載XRF作為法定的一般（bān）檢測方法，有利於規範和指導XRF在藥品質量控製中的應用，藥品（pǐn）中元素雜質（zhì）的檢測又增加一種有效的質量控製方法。

參考文獻：
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[8]2020《中國藥典》〔四部〕〈0461X射線熒光光譜法〉