硒(Seleniun,Se)是生命活動中必需的微量元素,在人體中以硒蛋白的形式存在,具（jù）有提高免疫、抗（kàng）氧化、抗腫（zhǒng）瘤、延緩（huǎn）衰老、解毒和（hé）抗輻射等（děng）生物與生理功能（néng）。人體硒缺乏會降低硒蛋白的表達及生物學功能的（de）正常發揮（huī）,會引起如貧血、冠心病、高血壓、癌症等40多種疾病,適量補硒有利於人體健康[1-3]。但硒（xī）對人體的有益（yì）生理功能必需控（kòng）製在安（ān）全濃度範（fàn）圍之內,補硒過量又會引起生物體中毒[4],世界衛生組織(WHO)、聯合國糧農（nóng）組織(FAO)、國際原子能機構(IAEA)均規定了明（míng）確指標:膳食硒的供給量為50~250μg•d-t,成人個體（tǐ）硒最高安全攝入量為400g•d-1[5]。人體從環境（jìng）中攝取硒的主要途徑是食物,食物鏈中硒又主要來源於植（zhí）物,因此對（duì）植物硒的準確測定顯得十分重要。
1、實驗部分
1.1方法
目前測定（dìng）硒的方法主（zhǔ）要有光學分析法(分光光度法、熒光法、原子熒光光譜法,原（yuán）子吸收法等)6[6-8]、電化學分析法(陰極溶出伏安法、極譜法等)[9,10]、色譜學分析法(離子色譜法、高效液相色譜法、氣（qì）相色譜法（fǎ）等)[11]、聯用技術(電感耦合等離子體質譜法)等[12,13],每種方法都有其優缺點,在不同的情況下可選擇適當的檢測方法進行分析。其中氫（qīng）化物發生-原子熒光光譜（pǔ）法(HG-AFS)因其測定硒（xī）具（jù）有較高的靈敏度和精確度,所用試劑毒性（xìng）小,操作簡便,實用性強,已入選食品安（ān）全國家（jiā）標準“食品中（zhōng）硒的測定(GB5009.93-2010)”的第一法（fǎ）[14]，尤其適（shì）合痕量硒的測定（dìng），本工作采用氫（qīng）化物（wù）發生-原子熒光光譜法測（cè）定植物樣（yàng）品中的硒。
植物硒多以有機形態存在，儀器測定前需轉化為無機離子，目前處理植物樣品的方法有幹灰（huī）法和濕（shī）法消解等方法，鑒於硒的易（yì）揮發（fā）特性，植物硒多采用濕法消解（jiě）。“國標（biāo）法-食（shí）品中硒的測定(GB 5009.93-2010)”采用（yòng）兩種濕消解法（fǎ）:硝酸（suān）十高氯（lǜ）酸“電熱板（bǎn）”敞開體係常壓消解法,硝酸（suān）十雙氧水“微波”密閉體係消解法。“電熱板”消解為傳統濕消解法,簡便成本低,易操作,但試劑消耗多,溫度不能精（jīng）確控製,消解時多憑經驗,消解（jiě）溫度過高或時間過長極易造成硒損失,溫度過（guò）低有機硒又不能完全（quán）被（bèi）消解,導致測定結果偏低。微波消解是目前被廣為推薦的（de）一種（zhǒng）微量元（yuán）素（sù）消解方法,程序控溫,氧化（huà）劑用量少,微波消解（jiě）時間短且完全（quán）,但缺點是微波消解後還（hái）需在電熱板上趕走殘留餘酸才能確保測量的準（zhǔn）確性。硒的易揮發性決定了硒必須低溫趕酸,這一步（bù）驟所需（xū）時間較長,總（zǒng）體消化過程中隻是節省了微波消解部分的時間,且單個樣品消化（huà）量較少,通常隻有0.1~0.5g。本法采用程序控溫的（de）石墨消解（jiě）儀消（xiāo）解（jiě）處（chù）理植物硒（xī）,單個樣品（pǐn）消（xiāo）化量可達10.0g以上,可以滿足（zú）痕量樣品的大稱樣量的分析要求。石墨消解雖屬於敞開體係,但具有微波消解（jiě）儀相同的自動控溫程序,裝有試樣的消解管全部包裹於石墨（mò）加（jiā）熱孔中（zhōng）,能量不易散失,加熱效率高且均勻,消解（jiě）趕酸能同時進行。且石墨消解管還自帶刻度,消解完成後無需轉移樣液可直接（jiē）定容,有別於電熱板和（hé）微波消解的二次（cì）轉移重新（xīn）定容過（guò）程,避免了在轉移過（guò）程中的汙染和損失。特別是儀器價格比微波消解儀低,經濟適用,常規實驗室（shì）都有能力購買,操作簡便安（ān）全,所用試劑毒性小,一次可處理大批樣品,尤（yóu）其適合植物樣品批量分析,其測定結果令人滿意。
1.2儀器與試劑
DS-360智能石墨消解儀;雙道原子熒光光譜儀,高性能硒空心陰極燈(北（běi）京有色金屬研究總院);超純水機,氬氣:純度為99,99%。
硝酸（suān）(HNO3)、高氯酸(HClO)、鹽酸(HCl)均為GR。硼氫化鉀溶（róng）液(10.0g•L-1):稱取5.0g氫氧化鉀（jiǎ）(KOHAR)溶於約500mL純水中,加入10.0g硼氫化鉀(KBH4CP),緩緩搖動使其溶解,定容至1000mL,混勻（yún）即可（kě）,現配現用。鐵氰化鉀(100g•L-1)溶液:稱取10.0g鐵（tiě）氰化鉀(K3Fe(CN)6),AR,溶於100mL純水中,混勻。植物標樣為（wéi）灌木葉(GBW07602/GSV-1)、柑橘葉（yè）(GBW10020/GSB-11)、茶葉（yè）(GBW10016/GSB7)、圓白菜(GBW10014/GSB-5),大米(GBW10010/GSB-1)分別購自地球物理（lǐ）地球化學勘査硏究所。
硒標準儲備液溶（róng）液(100mg•L-1),硒質控環境標準溶液(GSBZ50031-94(203710)),購自（zì）中國（guó）環境保護部標準樣品（pǐn）研究所。試驗（yàn）中純水為18.3MΩ•cm(25C)超純水。
1.3樣（yàng）品與測試液的製備
稱取2.0g(精確至（zhì）0.0001g)洗淨（jìng）60C烘幹粉碎的（de）植物樣,加入10.0mL硝酸十高氯酸(8+2)(g)混（hún）酸及幾粒玻璃珠於（yú）100mL刻度消解管中,上端（duān）放彎頸（jǐng）玻璃（lí）小漏鬥便於回流,混勻放置在石墨（mò）消解儀的石墨加（jiā）熱孔中,於通風良（liáng）好的通風櫥內冷消（xiāo）化過夜12h後,石墨消解儀會按預先（xiān）設定的消解程序進行升溫消化,升溫程序為:室溫→50C保持0.5h100C保持1h-→160C保持2h→-180C保持,最後保持時間視樣品消化情況（kuàng）而定。其間要觀（guān）察消化液（yè）顏色,若較深,及時補加硝酸,反複多次,直到沒有棕色氮氧化物氣體冒出。當溶液變為清亮無色（sè）並伴有濃白（bái）煙岀現時,繼（jì）續保持180C加熱,其間可加入1~2mL純水1~2次（cì）,目（mù）的（de）是趕殘餘酸,這樣可以解決濕法消解測定空白高的特點,直至加熱消化到（dào）剩餘體積為（wéi）2mL左右時,切不可蒸幹,取下冷卻至室溫,再加入5.0mL50%HCl(g)於剩餘消（xiāo）化液中,再次至於（yú）消解儀中升溫至100C(或（huò）沸水浴加熱),保持10~15mn,溶液變為（wéi）清亮無色並伴有白煙時,逐將Se+還原成（chéng）Se+。取出冷卻用純（chún）水定（dìng）容至25mL,密封（fēng）搖勻備用。同時做試劑空白。
測（cè）試（shì）液的（de）製備:按所需稀釋比例吸取以（yǐ）上待（dài）測液的（de）上清液1.0~5,0mL至10mL比色管中,加入適（shì）量（liàng）的（de）50%HCl(g)(以確保定容後的樣液酸度為15%),1.0mL鐵氰化鉀(10gg•L-1)溶液,純水定容並混勻。靜（jìng）置30min後上機測試
1.4硒標準溶液配製
將100mg•L-1硒標準儲備液用5%HCl溶液稀釋至100gg•L標準應用液。從100gg•L硒標準應用液中,分（fèn）別移取（qǔ）0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL至7個50mL容量瓶中,加入少量純水,再分別向每個容量瓶中加入50%HCl15.0mL(以（yǐ）確保定容後的樣液（yè）酸度為15%),5.0mL鐵氰化鉀(100g•L-1)溶液,純水定容,即可得到一組濃度為0.00,1.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00gg•L-1係列（liè）硒標準工作溶液
2、結果與討論
2.1原子（zǐ）熒光光譜儀（yí）工作參數
考慮燈電流、光電倍增管負（fù）高壓、載氣流量和反應介質等對分（fèn）析靈敏度、精確度（dù）和準確度的影（yǐng）響,結合AFS-9700型雙道原子熒光光譜儀的儀器條件,經反複試驗,確定了植物硒測（cè）定的最佳工作（zuò）參數,特別對讀數（shù）時間和延遲（chí）時間進行（háng）了反複摸索,最（zuì）終確定了讀數時間（jiān）為14s,延遲時間必須為6s時,在儀（yí）器的信號采集（jí）單元內才能獲得一個完整正態峰型,此時峰麵（miàn）積最大,達到（dào）了最佳積分效果,說明在上述儀器工作條件下,硒熒光強度響應值最高,結果見表1。
2.2消解液用量
準確稱取2.0mg(精確至0.0001g)植物標樣柑橘葉(GBW10020(GSB-11))樣品21份（fèn）,分3組,每組7次重複。分別加入混酸比為HNO3+HCl0O4(V+V)=(6+4),(8+2)和(9+1)消解液10.0mL及幾粒玻璃珠冷消解12h過夜,消解處理製樣（yàng）步驟同1.3,測試硒的相對熒（yíng）光值,結果見（jiàn）表2。
可知:混酸比為HNO3+HClO(V+V)=8+2處理的柑橘葉樣品中硒（xī）的相對熒（yíng）光值最（zuì）高,且試樣重複良（liáng）好,其餘兩組熒（yíng）光值偏低,重複不穩（wěn）定（dìng）,特別是混酸比為HNO3+HCIO4(V+V)=6+4一組重複差異較大。說明用HNO3+HCO4(V+V)=8+2混酸比消（xiāo）解處（chù）理柑（gān）橘葉樣品時,硒的提取最完全。
全植物樣品中含有大量有機質,在酸量較（jiào）少的情況下HClO1遇到（dào）大量的有機物不僅易發生爆炸,還會造成空白值偏高。實驗中（zhōng）加入的HClO41分別為4.0,2.0,1.0mL。發現HClO加（jiā）入量越多,消化液中HCIO4的殘留量就（jiù）越（yuè）多。如果消化至（zhì）剩餘體積的2mL左右時,HCO冒煙時間過長,硒有損（sǔn）失,則測定結果偏（piān）差較大;HClO44加入（rù）量少,消解速度慢,時間過短（duǎn）,消解液顏色（sè）深,有機（jī）質消解（jiě）又不完全。對於稱樣量為2.0g的柑橘葉樣品來說（shuō）,選擇混酸比HNO3HClO(V+V)=(8+2)mL,,HClO1加（jiā）入量為2.0mL,就可以使有機（jī）質充分消解。當稱樣量大（dà）時,可以相應增加HClO的量,最終消解液中（zhōng）HClO)殘留量約為0.5~1.0mL較為合適。其他實驗條件的影響研（yán）究（jiū）均采用(8十2)混酸比來消解植物樣品。
2.3消解溫度和消解時間的選擇
準（zhǔn）確稱取2.0g(精（jīng）確至0.0001g)植（zhí）物標樣茶葉(GBW10016)樣品和灌木（mù）葉(GSB07602)樣品各15份,分3組（zǔ）,每組5次重複稱樣,以2.2中HNO3+HClO4(V+V)(8+2)mL混酸比溶液進行消化處理（lǐ）,再以不同（tóng）的消解溫度（dù）進行消化處理,測試硒（xī）的相對熒光值,結果見表3。
準確稱取2.0g(精確至0.0001g)植物標（biāo）樣茶葉(GBW10016)樣品和灌（guàn）木（mù）葉(GSB07602)樣品各24份,分8組,每組3次（cì）重複稱樣,以2.2中HNO3+HClO4(V+V)(8+2)mL混（hún）酸比溶液,以表3中的160~180C為消化（huà）溫度,分別設定（dìng）8組消化時（shí）間為2,3,4,5,6,7,8,9h,測試硒的相對熒光值,結果見圖1。
由表3和圖1可知:消化溫（wēn）度控製在160~180C之間消（xiāo）化時（shí）間在（zài）6~7h之間時,兩種植物（wù）樣品硒的提取最（zuì）完全;當消化溫度<160C,或>180C時,消化時（shí）間過短或過長時,硒（xī）消化（huà）不徹底或容易揮發（fā）,都會導致熒（yíng）光值偏（piān）低且不穩（wěn）定。
2.4還原劑硼氫（qīng）化鉀(KBH4)和載流鹽酸(HCI)的（de）影響
在儀器條（tiáo）件不變的情況下,測試10Hg•L-的Se標準溶液隨載流HCl和（hé）還原劑KBH4濃度變化對硒熒光強度的影響,結果見圖2和圖3。可知,當（dāng）載流HCl和（hé）還原劑KBH4濃度低時熒光強度低,信號靈敏（mǐn）度差,說明（míng）還原能力弱;當載流HCl和還原劑KBH41濃度增大時,熒光（guāng）強（qiáng）度也隨之（zhī）增強;當兩者濃度太高時,反應產生的氫氣多,泡（pào）沫（mò）都易衝入管道,熒光強度反而會降低（dī）,這是由於過量的氫氣稀釋了火（huǒ）焰中硒（xī）原子蒸氣造成的。實驗結果表明:對於10pg•L1的Se標準溶液,還（hái）原劑KBH4濃（nóng）度在0.8%~2.0%(m/V)之間（jiān）,載流HC1濃度在（zài）4%~15%(g)之間,火焰平穩,熒光值達到最（zuì）大且穩定,信噪比和靈敏度最（zuì）高。綜合考（kǎo）慮選擇（zé）還原（yuán）劑濃度為1.0%KBH4(m/V)+0.5%KOH(m/V),載流（liú）HC1為10%(g)。
所配還原劑KBH4溶液要含有一定濃度的KOH以保證（zhèng）溶液的穩定性。建議KOH的濃度為0.2%~0.5%(m/V),濃度過（guò）低（dī）,KBH4會分解,濃度過高則會（huì）影響氧化還原反應的總體酸度,離開KOH和KBH4的（de）濃度來討論最佳酸度是毫無意義的。
2.5樣品酸度(HC的（de）選（xuǎn）擇樣
品消化過程的酸度確保了Se+還原（yuán）成Se+,上機測試（shì）前樣品經稀釋後製備液酸度也會影響（xiǎng）硒的測定結果。分別吸取（qǔ）100gg•L-標準（zhǔn）應用（yòng）液5.0mL於7個50mL的具塞比色管中（zhōng）,分別加入0.0,1.5,2.5,5.0,10.0,15.0,20.025,0mL濃（nóng）HCl,用純水稀釋定容至（zhì）刻度（dù）,用以製備不同酸度的10gg•L硒標準（zhǔn）溶液,以2.4中的最佳載流和還原（yuán）劑濃度進行上機（jī）測定,結果見圖4。可知,扣除空白後,HCl(g)在3%~20%範圍內,10gg•L-1硒標準溶液具有較強且穩定的熒光強度;當樣品HCl(q)>20%時,硒（xī）熒光值受到抑製且不穩定,考慮（lǜ）到樣品酸度的（de）提高有利於硒的還（hái）原,同時可以減（jiǎn）少共存元素（sù）的幹擾,故本方法選用15%HCl(g)酸度作為樣（yàng）品和標準溶液上機測試（shì）時製備液的酸度,才能保證測量的穩（wěn）定性和一致性。
2.6線性方程（chéng）、檢出限
植物樣品硒的測定中,標準（zhǔn）曲線範圍無需很大,本實驗在0~10!g•L-的濃度範圍內標準曲線線性相關很好,r=0.9999,回歸方程（chéng）y=131.67x+203.94;又（yòu）對0~100gL-濃度範圍進行了測（cè）定,其線性相關也（yě）很好（hǎo）,r=0.9997,回歸方程（chéng）為y=132.43x+315.13,說明本方法不僅靈敏度高,而且（qiě）線性範圍寬（kuān）。
在本（běn）實驗條件下,連續測定空白熒光值11次,並以3倍的標準偏差除以工作（zuò）曲線的斜率計算出溶液中硒的檢岀限0.018g•L-1,若以2.0g植物樣品最後定容25mL計算,樣品檢出限（xiàn）0.225gg•kg-1
2.7標（biāo）準物質分析及回收率（lǜ）和精密度
分別選取灌木葉、大米、圓白菜（cài）、茶（chá）葉和柑橘葉五種植物標準樣品,每種重複3次準確稱取2.0g(精確至0.0001g),按（àn）上述實驗條件進行消解,測定本底值。再對每種植物標樣稱取子樣,每種重複3次準確（què）稱取2.0g(精確至0.0001g),此次每種試樣中分別加入1.0mg•L-1硒標準溶液150,300,450gL,進行消解並測定加標後值,同時測定硒質控環境標準溶（róng）液(GSBZ50031-94(203710)),結果見表4。可見,硒標準加標回收率在87.1%~106.2%之間,精密度(n=3)在0.83%~5.69%之間,所測結果均與標準物質的參考值吻合,完全達到分析要求。
3、結論
采（cǎi）用（yòng）程序控溫石墨爐消解-氫（qīng）化物熒光光諧法在本文得到的最佳實驗條件下測定以柑橘葉（yè）、茶葉、灌（guàn）木葉、圓白菜、大米等為代表的幾種植物樣品中的（de）硒,線性範圍寬、靈敏度高（gāo）、檢出限低、穩定性好的顯（xiǎn）著特點,尤其適合這類批量（liàng）植物樣品中硒（xī）的痕量分析,且該方法操作簡（jiǎn）便（biàn）安全,實用性強,儀（yí）器成本（běn）低,所用試劑毒性小,可（kě）作為一般實（shí）驗室（shì）的常規分析方法。
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